土壤中性木聚糖酶（Soil Neutral Xylanase，S-NEX）測定試劑盒說明書

更新時間：2025-01-13

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土壤中性木聚糖酶（Soil Neutral Xylanase，S-NEX）測定

試劑盒說明書

微量法 100T/48S

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養物質的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業中，NEX 一般分離自最適生長pH 為 6-8 的微生物。

測定原理：

NEX 在中性環境中催化木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，在沸水浴條件下進一步與 3,5-二硝基水楊酸發生顯色反應，在 540nm 處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產生的還原糖量成正比，通過測定反應液在 540nm 吸光值增加速率，可計算NEX 活力。

組成：

產品名稱	BO6091-100T/48S	Storage
緩沖液：液體	10ml	4℃
試劑一：液體	3ml	4℃避光
試劑二：液體	10ml	4℃避光
說明書	一份

自備儀器和用品：

天平、常溫離心機、震蕩儀、恒溫水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板。

樣品處理：

新鮮土樣風干，過 30-50 目篩。

測定操作表：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 540nm。

2、操作表

	對照管	測定管
土樣（g）	0.02	0.02
緩沖液（μl）	150	100
試劑一（μl）		50
混勻，50℃震蕩反應 30min，立即 90℃水浴 10min，8000g，25℃離心 10min，取上清 100μl
試劑二（μl）	100	100
混勻，90℃水浴中顯色 5min，取 180μl 于微量石英比色皿/96 孔板測定 540nm 處吸光值 A，分別記為A 對照管、A 測定管，△A=A 測定管-A 對照管。

S-NEX 計算公式：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線：y = 1.6904x + 0.0058，R² = 0.9989

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克土壤每天分解木聚糖產生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。

S-NEX 活力（μmol/d/g 土樣）=（△A-0.0058）÷ 1.6904×V 反總×10³÷ W÷T÷ 150

= 28.4×（△A -0.0058）÷ W

V 反總：反應總體積，0.15ml；T：反應時間，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。 b.用 96 孔板測定的計算公式如下

標準曲線：y = 0.8452x + 0.0058，R² = 0.9989

酶活定義：50℃，pH6.0 條件下，每克土壤每天分解木聚糖產生 1μmol 還原糖所需的酶量為一個酶活單位。

S-NEX 活力（μmol/d/g 土樣）=（△A-0.0058）÷ 0.8452×V 反總×10³÷ W÷T÷ 150

= 56.8×（A540-0.0058）÷ W

V 反總：反應總體積，0.15ml；T：反應時間，1/48d；1000：1mmol/L =10³μmol/L；150：木糖分子量。

注意事項：

1. 保證震蕩反應 30min，使酶與底物充分接觸。

2. 注意 90℃水浴防止爆開，以免改變反應體系。

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